分光光度计用于确定溶液中某些化合物(例如蛋白质)的浓度。一般来说，一束光穿过装满样品的比色皿。测量样品吸收的光量。由于化合物吸收不同光谱范围的光，因此必须为分析设置正确的波长。有多种方法可以通过分光光度法计算未知样品的浓度，但使用参考标准可提供最佳准确度。此外，标准还指出分光光度计是否出现故障或其他分析问题。

　　通过直线方程计算

　　在分析开始时分析参考标准。标准是已知的浓度，用于校准设备和检查准确性。所有样品均应在标准的工作范围内。如果不是，则需要稀释样品或增加标准浓度。

　　制作带有标准浓度和吸光度读数的散点图或折线图。浓度在 y 轴上，吸光度在 x 轴上。例如，标准为 1 ppm、2.5 ppm 和 5 ppm。给出的吸光度为 1 ppm= .25、2.5 ppm= .5 和 5 ppm= .75。

　　格式化趋势线以在图表上显示方程式。该等式将显示公式 y=mx+b。例如，使用步骤 2 中的标准，方程为 y= .1224x + 0.1531。大多数趋势线在零处截取，但这取决于分析方法和 R 平方值。

　　分析未知样品并记录吸光度读数。

　　使用方程 (y=mx+b) 确定样品浓度。

　　理解直线方程

　　让“Y”等于浓度。这就是将要解决的问题。

　　让“X”等于样品的吸光度。这是分光光度计测量的吸光度。

　　让“”等于斜率，让“b”等于 y 截距。两者都给出，但是如果趋势线被迫通过 0，则“b”将为 0。

　　求解浓度。使用步骤 3 中的示例，将“x”替换为给定的 0.563 吸光度。所以：

　　y= .1224(.563) + 0.1531

　　y(浓度)= .222011